检测方案模板:新冠病毒核酸检测
一、前言
新冠病毒核酸检测是一种重要的疫情防控手段,对于疑似病例的及时诊断和疑似病例的及时采取隔离措施具有重要作用。本文将介绍一种新冠病毒核酸检测方案,包括样本采集、提取、纯化及扩增检测等步骤。
二、样本采集
1.采集对象:需进行核酸检测的对象,包括疑似病例、确诊病例、密切接触者等。
2. 采集方法:采用鼻咽拭子或口腔拭子采集样本。
3. 样本要求:采集时需注意以下几点:采集工具应保持干净、采样过程应避免气道分泌物、采样时应避免口腔唾液等。
三、提取
1.提取方法:采用0.9%的氯化钠溶液对鼻咽拭子或口腔拭子进行提取。
2. 提取液要求:提取液浓度为0.9%,pH值6.8-7.2,提取液中不得含有蛋白酶、核酸酶等。
四、纯化
1.纯化方法:采用高通量的PCR技术对提取液进行纯化。
2. 纯化条件:PCR反应体系温度为55-60℃,反应时间为4-6小时。
五、扩增检测
1.扩增方法:采用引物对目标序列进行PCR扩增。
2. 扩增条件:引物浓度为20-50μM,Tm
(延伸酶切点)为60-70℃,延伸时间30-60分钟。
六、结果判断
1.检测方法:采用实时荧光PCR检测方法对扩增产物进行检测。
2. 检测条件:荧光检测仪温度为37℃,背景光强度为2000IU/m²/min,信噪比为10-12。
3. 结果判断:若扩增产物的Ct值
(比值)在信噪比为10-12的范围内,且平均Ct值或最大Ct值不高于30,则判定为阴性;若Ct值
(比值)在信噪比为10-12的范围内,且平均Ct值或最大Ct值高于30,则判定为阳性。
七、注意事项
1.样本采集、提取、纯化及扩增过程中,应避免人员接触样本,防止交叉感染。
2. 样本采集、提取、纯化及扩增后,应及时进行检测,避免长时间存放导致检测结果偏差。
3. 结果判断时,应根据实际情况综合分析,确保检测结果的准确性。